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CAR-T细胞疗法需要先从患者体内获得T淋巴细胞，然后通过体外转基因技术 transduce CAR靶向结构域。这一过程需要在细胞培养体系中得到充分的扩增，以获得足够的治疗CAR-T细胞数量。因此，CAR-T细胞的体外扩增能力直接决定了能否获得满足治疗需要的细胞数量。我们可以通过多次传代培养获得的累积细胞数、细胞扩增的倍数增加(Fold increase)以及达到设定细胞数需要的培养时间来评估CAR-T细胞产品的体外扩增能力【1】。这些指标反映了CAR-T细胞的增殖和活力,是CAR-T细胞工艺开发的关键性能指标之一。
Fig1：CAR-T细胞体外扩增过程
CAR-T细胞输注入体内后的存活时间和持久性也是功能的重要衡量指标。持久存活的CAR-T细胞可以发挥更持久的肿瘤杀伤作用。我们通常通过流式细胞术定期检测外周血CAR-T细胞的数量变化来评估其在体内的持久性。一般输注后1-6个月甚至更长时间都可持续检出，检出峰值一般出现在输注后1-2周，峰值后的CAR-T细胞数量随时间递减是正常的【2】。理想的CAR-T细胞制剂应具有至少3-6个月的体内存活时间，这样才可以保证达到满意的治疗效果。
Fig2：CAR-T细胞体内持久性相关检测
Fig3：CAR-T细胞阻抗检测
CAR-T细胞识别肿瘤并激活后，会释放各种细胞因子和细胞毒颗粒来攻击和杀伤肿瘤细胞。所以我们可以检测CAR-T细胞释放的IFN-γ、肿瘤坏死因子-α、穿孔素、颗粒酶等水平，来评价其毒杀肿瘤的细胞毒活性以及活化状态【4】。体外我们可以通过共培养CAR-T细胞和靶肿瘤细胞,检测上述细胞因子和毒素的含量。脱颗粒实验也可以直观反映CAR-T细胞释放穿孔素和颗粒酶的水平，这些都是评价CAR-T细胞产品杀伤活性的重要指标。
Fig4：CAR-T细胞击杀靶细胞能力检测
Fig5：CAR-T细胞长久持久性检测
Fig6：CAR-T细胞治疗B-NHL的CRS分级
CAR-T疗法作为时下最热门的明星疗法，紧随国内第三款CAR-T产品获批上市，相关CAR-T企业和平台纷纷加速研发步伐，积极着眼于差异化布局。未来相关企业除竞逐产品安全性能，降本增效将势在必行，国产替代也将成为产业发展的主要途径。免疫磁珠作为CAR-T细胞制备的重要物料，在T细胞分选/激活环节扮演着相当重要的角色。同立海源生物GMP级产品ActSep®CD3/CD28分选激活磁珠（货号：GMP-TL603）集分选和激活功能于一体，高效实现T细胞的分选、激活和扩增，适合于人T细胞、CAR-T等多种T细胞培养技术的应用，并且该产品已完成美国FDA的DMF II型备案（备案号：038124），支持细胞药物注册申报。
不同的磁珠添加比例下，T细胞激活培养14天后检测LAG3和PD1的表达水平， ActSep®与竞品基本持平，3：1的磁珠与细胞比例下，ActSep®耗竭指标表达更低。此外，在Day 5去除磁珠，将进一步降低T细胞的耗竭水平。
参考文献：
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【5】 Goodman DB, Azimi CS, Kearns K, Talbot A, Garakani K, Garcia J, Patel N, Hwang B, Lee D, Park E, Vykunta VS, Shy BR, Ye CJ, Eyquem J, Marson A, Bluestone JA, Roybal KT. Pooled screening of CAR T cells identifies diverse immune signaling domains for next-generation immunotherapies. Sci Transl Med. 2022 Nov 9;14(670):eabm1463.
【6】 《CD19 CAR-T治疗B-NHL毒副作用临床管理中国专家共识（2022）》
关于同立海源
北京同立海源生物科技有限公司，专注细胞和基因治疗（CGT）GMP级原料试剂研发及生产，为CGT用户提供产品与服务的整体解决方案。产品涉及细胞分选磁珠试剂、真核/原核重组蛋白、无血清培养基、细胞培养试剂盒等。
公司建有3200㎡的研发实验室及GMP级洁净车间，包括细胞分选磁珠开发平台、真核与原核蛋白表达工程平台、无血清培养基开发平台，通过ISO13485和ISO9001双质量体系认证，部分产品已获美国FDA DMF备案。
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