前脑是大脑的一个重要部分,包括端脑和间脑,对认知、视觉、注意力及记忆等高级功能至关重要。前脑的发育异常可能会导致癫痫、精神分裂症、自闭症等神经系统疾病的发病。前脑类器官由人多能干细胞(hPSCs)分化而来,可以用于研究人类大脑发育、构建疾病模型和药物筛选。前脑类器官培养通常需要三个阶段,hPSC的培养和传代,hPSC向神经细胞分化和前脑球状体(hCS)的形成。
图1hPSC生成前脑球状体的流程图
第一阶段:hPSC的培养和传代
在MEF饲养层上接种hPSC,参考表1配制hPSC培养基,用hPSC培养基培养细胞并每天换液,培养5天。重组人bFGF蛋白(Cat#TL-901)参与hPSC培养,维持细胞干性并促进hPSC增殖。
表1hPSC的培养和传代
在第5天时,悬浮的hPSC形成球状体。参考表2配制神经诱导培养基,用移液器将球状体转移至神经诱导培养基,继续培养6天并定期给培养基换液。
表2神经诱导培养基
第11天时,用表3中的神经分化培养基替换神经诱导培养基,继续培养10天,每天换液。重组人EGF蛋白(Cat#GMP-TL613)和重组人bFGF蛋白(Cat#TL-901)参与hPSC向神经细胞分化。
表3 神经分化培养基
第三阶段:前脑球状体(hCS)
第21天时,转移至前脑球状体形成培养基继续培养,每2-3天给培养基换液,培养至48天,形成前脑球状体(hCS)。重组人BDNF蛋白(Cat#TL-770)参与前脑球状体的形成。
表4前脑球状体形成培养基
安全性能高:无LDEV(乳酸脱氢酶升高病毒)、细菌及支原体 浓度多样:浓度范围在8-20 mg/mL之间 低内毒素:内毒素含量<1.5EU/mL 性能稳定: 成胶性能稳定 采用COP瓶包装:可耐受-196°C低温储存、不易破碎、无蛋白吸附性、不易产生脱片