人
<2EU/mL
棕色液体
2~8℃
6个月
实验步骤
1.1 将人的PBMC细胞重悬于含1% HSA的PBS缓冲液中,取样计数,取1×10⁷个细胞至1.5mL Ep管中,1500rpm,离心5min。
1.2 弃上清,取80μL MACS Running buffer(130-091-221)溶液重悬,加入20μL NanoSepTM CD14分选磁珠,混匀后将其放入2~8℃冰箱孵育15min。
1.3 取LS分选柱(130-042-401)放入MACS分选器(130-042-303)上,用1mL MACS Running buffer润洗两次。
1.4 将孵育完成后的样品从2~8℃冰箱取出,加入1mL MACS Running buffer,1500rpm,5min离心,弃上清。
1.5 加入1mL MACS Running buffer重悬,将样品加入分选柱中,待其自然流出后,分两次加入 MACS Running buffer,每次加1mL,15mL管收集流出液。
1.6 待MACS Running buffer全部流出后,将分选柱从MACS分选器上取下,放到另一新的15mL离心管中,向分选柱中加入3mL MACS Running buffer,用LS分选柱配套活塞将液体直接打出。
1.7 将装有收集液的15mL离心管放入水平离心机,1500rpm,离心5min。
1.8 离心完成后倒掉上清,取1mL 1×DPBS溶液重悬细胞,计数并进行流式检测。
磁珠与细胞孵育时需要彻底混匀,以提高分选效率。
MaxSortin™CD14分选磁珠可用于富集分选或者去除分选人PBMC中的单核细胞和巨噬细胞,通过在磁珠上偶联抗CD14单克隆抗体,实现CD14⁺细胞的分选。利用MaxSortin™CD14分选磁珠与PBMC孵育并进行磁性分离,使CD14⁺细胞分离并富集,起到纯化CD14⁺细胞的作用和功能。